本文分别以甲醇/水、乙腈/乙酸铵、液相乙腈/水作为液相色谱流动相,色谱对50.0ug/L的法测标准样品进行优化条件测定。当流动相为甲醇/水和乙腈/乙酸铵时,定水联苯胺不出峰,中联而流动相为乙腈/水时,苯胺分离效果更好,高效峰形也较好。液相因此,色谱选泽乙腈/水溶液作为联苯胺的法测流动相组成。
本文对液相色谱流动相的比例进行优化实验,设置乙腈/水(v/v)的中联比例依次为80/20、70/30、苯胺60/40、高效50/50、40/60,用50.0ug/L的标准样品进行优化条件测定,结果见图1。当流动相比例为乙腈/水(v/v)=60/40时,联苯胺分离效果最好,响应值也最高,因此选泽乙腈/水(v/v)=60/40作为流动相比例。
本文对液相色谱流动相的流速进行优化实验,设置流速为0.6ml/min、0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min,用50.0ug/L的标准样品进行优化条件测定,结果见图2。当流速为1.2 ml/min时,由于流速较快,联苯胺在色谱柱内不能完全分离,分离效果差且标准样品浓度偏低;当流速为时0.6ml/min和0.8ml/min时,虽然分离效果能够满足测定要求,但分离速度过慢,保留时间滞后,影响整个实验的进程,所以最终选择以1.0ml/min作为流动相流速。
本文对液相色谱色谱柱温度进行优化,设置温度分别为25℃、30℃、35℃、40℃、45℃,用50.0ug/L的标准样品进行优化条件测定,结果见图3。由结果可得,当温度低于35℃时,联苯胺的色谱图峰形较差,分离效果差且标准样品浓度偏低;温度高于40℃时,联苯胺标准样品的浓度也偏低,可能是在较高温度下,联苯胺存在一定的损失,所以最终设定40℃为色谱柱温度。
以优化后的色谱条件将标准溶液系列由低浓度到高浓度依次进入高效液相色谱仪荧光检测器进行测定,以联苯胺的浓度(ug/L)为横坐标,以其对应的峰面积为纵坐标,建立一元线性回归方程,数据详见表1。标准曲线为Y=0.8701X-0.2952,线性系数r=0.9996。
用上述方法配制浓度为10.0ug/L和100ug/L的标准溶液,按照优化后的仪器条件,对样品分别进行测定,两种浓度各测定6次,根据测定结果分析空白加标回收率。10.0ug/L平均加标回收率范围在98.8%~110%之间,相对标准偏差为4.05%;100ug/L平均加标回收率范围在94.1%~104%,相对标准偏差为2.38%。准确度和精密度均都符合标准要求的范围,结果详见表2。
按照仪器的最佳条件,对5.00ug/L浓度样品进行平行测定7次,通过计算公式:检出限=t(n-1,0.99)×S,计算水质中联苯胺的检出限(t(n-1,0.99)值为3.143)。水质联苯胺测定检出限小于等于方法检出限(取水样150ml浓缩至2.0ml,浓缩75倍),结果详见表3。
因自然水体中联苯胺含量极低,多为未检出,所以自制基体加标样品作为实际样品进行分析,同时做空白实验,测定结果详见表4。
本实验采用高效液相色谱荧光检测器测定水中的联苯胺。样品经C18固相萃取柱吸附后,用甲醇和乙酸溶液去除杂质,最后用氨水-甲醇混合溶液洗脱,用氮吹仪浓缩定容至2ml,用液相色谱仪荧光检测器进行测定。结果如下:在添加浓度为10.0ug/L和100.0ug/L的条件下,平均加标回收率在94.1%~110%之间,相对标准偏差在2.38-4.05%之间,方法检出限为0.004ug/L(方法上的检出限为0.006ug/L),方法的曲线线性好,均符合实验要求。
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