薇菜作为食用蔬菜已有悠久的水煮历史,过去在荒年是薇菜救荒草,现已步入高档餐桌,中食其经济效益为一般蔬菜的品添4~5倍。野生薇菜鲜嫩味美,加剂营养丰富,水煮未展开的薇菜嫩叶尤为上品。薇菜既可鲜食,中食又可腌渍、品添干制,加剂是水煮向日本出口的大宗山珍野菜。水煮薇菜中主要含有防腐剂和甜味剂,薇菜由于日本的中食标准严苛,因此检测出口食品中的品添食品添加剂含量达到标准,对于国内食品添加剂含量的加剂检测也是一种保障。
我国标准检测方法有很多,如滴定法、比色法、薄层色谱法、气相色谱法等,但都是对样品分别处理进行不同方法的测定,没有同时检测的方法。现在相对先进的检测机构都在研究这5种食品添加剂同时检测的方法,针对于不同的基质使用不同方法,目前按照检测样品的不同大致可以分为肉食品、饮品、乳制品、含油量高的基质和普通基质等检测方法。在我国国标中,最早出现对于食品添加剂检测的是在2003年,那时的检测针对于单独的添加剂且方法相对落后。本法采用一种简单的前处理方法,使用的样品为水煮薇菜,基质简单易得,用高效液相色谱法对5种添加剂同时进样,一次检测得到多种结果,大大节省了人力、物力和时间,结果准确可靠。
一、材料与方法
1、材料与试剂
甲醇(色谱纯):FisherScientific公司;乙酸铵(分析纯)、称取1.54g乙酸铵加水溶解并稀释至1000mL,静置,过0.45μm孔径滤膜,盐酸(分析纯):量取100mL盐酸,与100mL水充分混合,静置);氨水、乙醚(分析纯):天津市科密欧化学试剂有限公司;实验用水为屈臣氏蒸馏水
2、仪器与设备
LX—130离心机(控温)日本TOMY公司;UW402S电子天平,梅特勒一托利多有限公司;UMV一2多管涡旋混合器,北京优晟联合科技有限公司;Agilent一1100高效液相色谱仪,安捷伦公司;50mL离心管、10mL移液管、移液枪、一次性吸管、pH试纸、0.5μm水性滤膜等。
3、样品前处理
大多数样品中存在许多大分子物质,如蛋白质、脂肪等,需要使用沉淀剂进行净化处理,如乙酸锌、亚铁氰化钾等,但本样品不含有上述大分子物质,故无需进行净化操作。
本法为反提法,即将样品中的食品添加剂先正提取到乙醚层中,后用水反提取至水层中,定量检测水层中的食品添加剂。
将水煮薇菜经破碎处理后,称取2.0g样品于50mL离心管中,加水10mL和0.5mL盐酸(1+1)进行酸化处理。加入乙醚8mL震荡提取2次(共16mL),合并提取液。将提取液震荡,离心(4000r/nlin,5min),弃掉下层水层,向提取液中准确加入10.0mL水,加氨水调节pH为7~8,震荡离心(4000r/min,5min),取下层水层过0.45μm水性滤膜。
4、标准品配制
标准物质纯品溶液稀释,配制成10mg/L浓度的储备液,将储备液稀释成0.01,0.03,0.05,0.07,0.09,0.10rng/mL的标准溶液,用于测定标准曲线。
5、色谱柱条件
WatersSymmetryShieldC18(150mm×4.6mm,5μm)色谱柱,流动相为0.02mol/L乙酸铵一甲醇(100+5)缓冲溶液,检测波长为220mm,紫外检测器,柱温25℃,流速1mL/min,进样量10μL。
6、精确度测定
为保证试验精确度,取6份样品分别编号1,2,3,4,5,6,各称取2g于50mL离心管中,加入10mL水和0.5mL盐酸(1+1)进行酸化处理。分别加入8mL乙醚提取2次(共16mL),合并提取液经震荡离心(4000r/min)5min,弃去下层水层,准确加入10.0mL水,用氨水调节pH为7~8,震荡离心(4000r/rnjn,5min),取下层水层过0.45μm水性滤膜。
7、准确度测定
为保证试验方法提取到的添加剂含量的有效性,人为地向样品中添加定量标准物质进行检测,通过回收率判断样品的检测结果是否有效。大量实验证明,当回收率在85%~110%之间时,结果可靠。向样品中加入1mg/L的混标溶液,与样品进行相同的前处理步骤,经0.45μm滤膜过滤后进仪器检测。
二、结果与分析
1、标准曲线的建立
对混标稀释后浓度为0.01,0.03,0.05,0.07,0.09,0.10mg/mL的标准系列溶液进行测定,以质量浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,分别得到回归方程,见表1。安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸、脱氢醋酸钠这5种添加剂的出峰图见图1,按照出峰的时间分别是安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸、脱氢醋酸钠。
由表1可知,该混标溶液出峰时间分散,在检出限浓度范围内呈良好线性关系。
由图1可知,5种添加剂出峰时间间隔明显,且峰不存在重合现象,即如果样品中含有上述5种添加剂,谱图中会在相应位置出峰。
2、样品测定
对水煮薇菜使用反提法检测食品添加剂含量,其结果见表2,谱图见图2。
对比图1和图2可以看出,图2中的谱图没有在相应位置出峰,所以水煮薇菜样品中不含有安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸、脱氢醋酸钠这5种食品添加剂。
3、精确度试验
为保证样品的精确度,分别对水煮薇菜进行6次平行试验,试验结果见表3。
由表3可知,进行6次平行试验均无检出添加剂,可能的情况是含有添加剂,但含量低于检出限导致未检出;另一种情况是均不含添加剂,故无检出。上述2种情况均达到标准,结果判定为水煮薇菜不含有安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸、脱氢醋酸钠5种添加剂。
4、准确度试验
为了保证检测的准确度,进行回收试验,标准曲线见图3,结果见表4。
由图3和表4可知,人为加入含有混标的样品检测结果是含有添加剂的,且同一种方法回收得到的添加剂含量不同。回收率可以证明该方法得到的结果可信,因为在前处理过程中提取得到的添加剂会有一定程度的损失;当回收率低于100%时证明提取不完全或者有损失;当回收率高于100%时,说明样品中同时也含有该添加剂。本法的相关系数均在0.999以上,回收率在89%以上,说明试验结果可靠。
5、结果计算
样品中山梨酸、苯甲酸、脱氢醋酸钠、安赛蜜、糖精钠的含量按照下式计算:
式中:X为样品中食品添加剂含量,mg/kg;A为进样体积中食品添加剂的含量,mg;V为试样稀释体积,mL;m为试样质量,g。
三、讨论
试验表明:对样品进行破碎、浸提后,使用WatersSymmetryShieldC18(150mm×4.6mm,5μm)色谱柱,流动相为0.02mol/L乙酸铵一甲醇(100+5)缓冲溶液,检测波长为220mm,紫外检测器,柱温25℃,流速1mL/min,进样量10μL时,混标中安赛蜜、糖精钠、山梨酸、苯甲酸、脱氢醋酸钠的出峰时间分别为4.785,6.681,8.117,11.310,12.987min,样品中未检出。不同回收率表明在实验操作过程中,会有不明原因的损失,可能是提取时间不足,可能是提取试剂还有待改善,还有可能是检测时间不及时,导致部分添加剂降解。在国标中以水煮薇菜为例,使用反提法检测5种食品添加剂,方法简便,可以节约大量人力、物力,节约成本和资源,加快工作效率。
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